凝膠成像分析系統(tǒng)分析詳解
凝膠成像分析系統(tǒng)用于對電泳凝膠圖像的分析研究,采用數字攝像頭將置于暗箱內的電泳凝膠在紫外光或白光照射下的影像取進計算機,通過相應的凝膠分析軟件,可一次性完成DNA、RNA、蛋白凝膠、薄層層析板等圖像的分析,zui終可得到凝膠條帶的峰值、分子量或堿基對數、面積、高度、位置、體積或樣品總量。
從整體總的來說凝膠成像分析系統(tǒng)可應用于:蛋白質、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結果作定性分析。
1、分子量定量
對于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結果較肉眼觀察估計要準確很多。
2、凝膠成像分析系統(tǒng)密度定量
一般常用的測定DNA和RNA濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶進行密度標定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對PA GE蛋白膠條帶的濃度測定。
3、密度掃描
在分子生物學和生物工程研究中,凝膠成像分析系統(tǒng)我們zui常用到的是對蛋白表達產物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統(tǒng)的方法就是利用的密度掃描,但利用生物分析軟件結合現(xiàn)在實驗室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像分析系統(tǒng)就能完成此項工作。
4、PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分數。就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進行相對密度定量并計算其占總和的百分數,密度掃描時并對選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。
凝膠成像分析系統(tǒng)種類:
1、普通凝膠成像分析系統(tǒng)系:可以對蛋白電泳凝膠,DNA凝膠樣品進行圖象采集并進行定性和定量分析。
2、化學發(fā)光成像分析系統(tǒng):成像范圍涵蓋UV、EB、化學發(fā)光、紫外-熒光、有色及可見樣品成像。
3、多色熒光凝膠成像分析系統(tǒng):成像范圍涵蓋UV、EB、化學發(fā)光、多色熒光熒光、有色及可見樣品成像。
4、多功能活體成像分析系統(tǒng):UV、EB、化學發(fā)光、多色熒光熒光、有色及可見樣品成像和離體組織和小型動物,及大型型動物。