PCR新手指南：*復(fù)性溫度的選擇標(biāo)準(zhǔn)
*復(fù)性溫度的選擇標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是可擴(kuò)增范圍的中間溫度。
在使用溫度梯度的方法尋找*復(fù)性溫度時，新手往往會選擇擴(kuò)增產(chǎn)物zui多的溫度條件，然而在此后的非梯度擴(kuò)增時擴(kuò)增效果又不太理想。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的主要原因是*復(fù)性溫度的選擇標(biāo)準(zhǔn)不對。本人10多年前做過數(shù)千個基因的擴(kuò)增，通過溫度梯度實驗發(fā)現(xiàn)，能擴(kuò)增出來的溫度范圍一般在3-30度。選擇的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是可擴(kuò)增范圍的中間溫度。
因為：
1、擴(kuò)增產(chǎn)物量的影響因素很多，有些是隨機(jī)的。從定量PCR的平臺期高低的不規(guī)律可以看出來。
2、不同儀器、不同位置的溫度及溫度變化曲線是有差異的。按照儀器廠家的出廠標(biāo)準(zhǔn)也準(zhǔn)確性+-0.3度及均勻性+-0.3度
3、PCR儀進(jìn)行梯度擴(kuò)增時的溫度準(zhǔn)確性會更差
選擇中間溫度可以消除儀器溫度差的影響。
另外，進(jìn)行溫度梯度時模板量的選擇也是非常重要的。
上海嘉鵬科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)：紫外分析儀、三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、暗箱三用紫外分析儀、暗箱紫外分析儀、手提式紫外分析儀、三用紫外分析儀暗箱式、紫外檢測儀、部分收集器、恒流泵、蠕動泵、凝膠成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器、漩渦混合器、玻璃層析柱、梯度混合器、梯度混合儀、核酸蛋白檢測儀、玻璃層析柱、熒光增白劑測定儀、餾分收集器、切膠儀、藍(lán)光切膠儀、層析系統(tǒng)等產(chǎn)品。咨詢。
在線客服
電話咨詢