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大鼠Wnt-2b蛋白（WNT2b）酶聯(lián)mianyi檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
  • 發(fā)布日期：2019-06-21     信息來(lái)源：      瀏覽次數(shù)：1415

      • 使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)。本酶聯(lián)mianyi試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來(lái)檢測(cè)大鼠Wnt2B，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
      用    途：用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Wnt2B測(cè)定。
      工作原理
         本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)mianyi吸附法（ELISA）測(cè)定樣品中大鼠Wnt2B水平。向預(yù)先包被了大鼠Wnt2B單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠Wnt2B，溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗Wnt2B抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成mianyi復(fù)合物，再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠Wnt2B的濃度呈正相關(guān)。
      試劑盒組成

      試劑盒組成48孔配置96孔配置保存
      說(shuō)明書(shū)1份1份 
      封板膜2片（48）2片（96） 
      密封袋1個(gè)1個(gè) 
      酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存
      標(biāo)準(zhǔn)品160ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
      標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
      鏈霉親和素-HRP3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
      生物素標(biāo)記的抗WNT2B抗體0.5ml×1瓶1 ml×1瓶2-8℃保存
      顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
      顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
      終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
      濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存

       
      需要而未提供的試劑和器材

      1. 37℃恒溫箱。
      2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
      3. 精密移液器及一次性吸頭
      4. 蒸餾水，
      5. 一次性試管
      6. 吸水紙

       
      注意事項(xiàng)

      1. 從2-8℃取出的試劑盒，在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
      2. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差
      3. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
      4. 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
      5. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
      6. 底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

       
      洗板方法
      手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
       
      自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中
      標(biāo)本要求
      1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
      2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
      操作程序

      1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)?本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)
      80ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
      40ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
      20 ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
      10ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
      5 ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

       
        2.根據(jù)代測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
        3.加樣：1）空白孔，空白對(duì)照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗WNT2B抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；3）代測(cè)樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗WNT2B抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
        4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
        5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
       6.顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
       7.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
       8.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
       9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。 
       
      操作程序總結(jié)：


      試劑盒性能：
      1.樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
      2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%
       檢測(cè)范圍：
      檢測(cè)范圍：2ng/L -90ng/L
       保存條件及有效期：
       保存：2-8℃。
      有效期：6個(gè)月(2-8℃)。